通用基因组DNA提取试剂盒
产品介绍
通用基因组DNA(gDNA)提取试剂盒(本试剂盒)采用可特异性结合DNA的超顺磁性磁珠和独特的缓冲液系统,适用于从血液制品及多种样品中提取得到高质量gDNA分子。本试剂盒具有提取效率高、核酸纯度高、重复性强等优点。整个操作过程简单且快速,得到的gDNA可直接用于定量PCR和二代测序文库构建等后续实验。本试剂盒亦可供自动化核酸提取仪使用,简单、快速地进行大规模提取,显著降低操作者的工作量和人为误差。
适用范围:血液、血清、血浆、干血片、细胞重悬液、动物组织等。
预期用途:用于从全血样本中提取、富集和纯化基因组DNA。
通用技术参数
【主要成分】
试剂盒主要成分及规格
试剂组分名称          规格与数量(10T/盒)           规格与数量(48T/盒)           规格与数量(96 /盒)
Buffer SWB1              4mL/瓶×1瓶                       20mL/瓶×1瓶                     40mL/瓶×1瓶
Buffer SWB2              4mL/瓶×1瓶                       20mL/瓶×1瓶                     40mL/瓶×1瓶
Buffer SW1                 6mL/瓶×1瓶                      30mL/瓶×1瓶                      60mL/瓶×1瓶
Buffer SW2                12mL/瓶×1瓶                     60mL/瓶×1瓶                     120mL/瓶×1瓶
Buffer SE                    2mL/支×1支                      10mL/瓶×1瓶                       20mL/瓶×1瓶
蛋白酶K                      0.2mL/支×1支                     1mL/支×1支                        2mL/支×1支
SN300(磁珠)          0.2mL/支×1支                     1mL/支×1支                        2mL/支×1支

【储存条件及有效期】
本试剂盒中不同试剂组分存储条件不同,请按存储条件分别储存。
试剂组分名称       存储条件                    有效期
蛋白酶K                2-8℃                         12个月
SN300(磁珠)    2-8℃                         12个月
其他试剂          15-30°C干燥环境            12个月
注意:
1. 蛋白酶K(货号:SN105)可2-30°C运输,请在收货后置于2-8°C储存;
2. 若溶液有沉淀析出,为正常现象,不影响试剂性能,使用前请将该溶液置于37°C水浴中预热10分钟,待沉淀溶解,摇匀后使用。

【前处理】
A. 液体样品(血液、血清、血浆、细胞重悬液等样品)
在1.5mL离心管中,加入20µl蛋白酶K和200µl样品(血液、血浆、血清、细胞重悬液或其它液体样品),加入400µL Buffer SWB2,颠倒混匀3 次,70ºC 振荡温育10分钟(注:若为粘稠度极高的全血样本,则需先加入200µlBuffer SWB1进行预分散以保证Buffer SWB2裂解效果)。
B. 动物组织(<10mg 动物组织)
将不超过10mg 的组织样品(约米粒大小)转移至1.5ml离心管中,加入20µl 蛋白酶K 和200µl Buffer SWB1,55℃振荡温育30-120分钟或直至样品完全消化,加入200µl Buffer SWB2,涡旋5秒,70℃水浴10 分钟。
C. 干血片(FTA Card 或其它干血片)
转移1-5个3毫米直径的血片至2.0ml 离心管中,加入20µl蛋白酶K和300µl Buffer SWB1,55ºC振荡(1200-1500rpm)温育30分钟,加入500µlBuffer SWB2,65ºC振荡(1200-1500rpm)温育20 分钟。
D.干拭子样品
转移干拭子至2ml离心管中,加入400µl Buffer SWB2和20µl 蛋白酶K 至样品中,65℃振荡温育30分钟。
E. 湿拭子(含细胞保存液)
10000×g 离心1分钟收集脱落细胞,吸弃多余保存液,余下250µl 保存液和拭子,加入150µl Buffer SWB1和20µl 蛋白酶K,65ºC 振荡(900-1200rpm)温育30分钟。
F. 唾液样品
在1.5ml 离心管中,加入20µl 蛋白酶K和200µl唾液或拭子浸泡液,65ºC振荡温育30分钟。
G. 细胞(培养细胞或脱落细胞,不超过1×106个细胞)
取适量培养液、尿液、羊水或腹水等液体样品至离心管中,2000×g 离心10 分钟收集细胞,去除上清液,余下50µl 残液和沉淀,涡旋重悬细胞。加入150µl Buffer SWB1和20µl蛋白酶K,55ºC 振荡温育20分钟,加入400µl Buffer SWB2混匀。
【提取纯化步骤】
以200 μl全血样本体积为例。
1.前处理结束后,加入20μL SN300,振荡混匀30 秒后,室温放置5分钟,期间轻柔颠倒混匀2-3次。将离心管置于磁力架上,静置1-2分钟,待溶液澄清之后,保持磁珠吸附状态,小心移除上清。
▲为避免实验误差,SN300务必混合均匀后再加入。
2. 将离心管取下磁力架,加入600μL Buffer SW1,用移液枪吹散磁珠并吸打或涡旋振荡混匀5-10秒,置于磁力架上,待溶液澄清之后,小心移除上清。
3. 将离心管从磁力架取下,加入600μL SW2,涡旋混匀5-10秒,将离心管置于磁力架,待溶液澄清之后,小心移除上清。
4. 重复第4步一次,小心吸尽上清。
5. 开盖室温晾置约5 分钟至管内无液体残留,磁珠表面无反光。
▲磁珠开盖晾干,避免乙醇残留(否则会影响提取效率);避免磁珠过分干燥(龟裂) ,以免影响最终产量。
6. 将离心管取下磁力架,加入50-100μL Buffer SE,用移液枪吹散磁珠或涡旋振荡混匀3-5秒,65℃孵育3分钟,期间涡旋混匀1次,后将离心管置于磁力架上,待溶液澄清之后,吸取上清至干净的离心管中。
▲洗脱体积可根据实验需求进行调整。
▲洗脱产物可直接进行下一步实验或置于-20℃保存。

【DNA浓度及纯度检测】
所获DNA片段大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关,可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于约50 μg/mL双链DNA或40 μg/mL单链DNA。
OD260/280比值应为1.7-1.9,若洗脱时不使用BufferSE,而使用ddH2O,该比值会偏低(因pH值和离子会影响光吸收值),但并不表示纯度低。

【注意事项】
1. 本产品仅用于科研用途,不用于临床诊断,使用前请仔细阅读说明书;
2. 试验前请熟悉和掌握需使用的各种仪器的操作方法和注意事项;
3. 所有试剂从规定的存储环境中取出时,按照要求使用,使用前试剂应摇匀,混匀后使用;
4. 每次加样均应使用移液器;
5. 所有样本及试剂应避免直接接触皮肤和眼睛,切勿吞咽,一旦发生类似情况请立即用大量清水冲洗并及时到医院就诊;
6. 所有样本和各种废弃物均应按相关法规规定的处理。
 
 
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